免疫電鏡技術(shù)簡(jiǎn)介（IEM）
免疫電鏡技術(shù)（immunoelectron microscopy，IEM）又稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是在免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，它是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，在超微結(jié)構(gòu)水平上定位、定性及半定量抗原的技術(shù)方法。
免疫電鏡技術(shù)（Immunoelectron microscopy，IEM）也稱免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是由免疫化學(xué)技術(shù)與電鏡技術(shù)相結(jié)合的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段，是在超微結(jié)構(gòu)水平研究和觀察抗原、抗體結(jié)合定位的一種方法學(xué)。
抗原、抗體的相互作用是免疫化學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)，它具有高度的特異性，結(jié)合電鏡的高分辨和放大特點(diǎn)，可以在超微結(jié)構(gòu)和分子水平上研究各種組織和細(xì)胞內(nèi)的免疫反應(yīng)，并能精確定性、定位和半定量，使形態(tài)與機(jī)能緊密結(jié)合。
根據(jù)標(biāo)記方法的不同，免疫電鏡技術(shù)分為免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)，其中目前應(yīng)用較多的是膠體金技術(shù)。
免疫膠體金電鏡染色主要具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
（1）膠體金能穩(wěn)定并迅速地吸附蛋白，而且蛋白的生物活性不發(fā)生明顯改變，可制備抗體-膠體金、蛋白A-膠體金、卵白素-膠體金、植物凝集素-膠體金等用于免疫電鏡；
（2）在電鏡下金顆粒電子密度高、圓形且界線清晰，易于辨認(rèn)，定位比酶反應(yīng)物更精確；
（3）膠體金標(biāo)記物易于制備，并可以根據(jù)需要制備大小不同（1～150nm）的膠體金，因此可進(jìn)行免疫電鏡的雙重或多重標(biāo)記；
（4）金顆粒能發(fā)射強(qiáng)烈的二次電子，是掃描電鏡的理想標(biāo)記物；
（5）膠體金經(jīng)過銀顯影增強(qiáng)后，金顆粒外周吸附大量銀顆粒而呈現(xiàn)黑色或黑褐色，因此也能用于光學(xué)顯微鏡觀察。此外，膠體金還能用于冷凍蝕刻標(biāo)本的免疫標(biāo)記。
免疫電鏡膠體金標(biāo)記法近年來被成功地應(yīng)用于生物學(xué)的各個(gè)方面，并取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展。在腎病、腫瘤、神經(jīng)病變、病毒檢測(cè)以及肺部炎癥等多個(gè)領(lǐng)域中，為解決一些醫(yī)學(xué)上的微觀結(jié)構(gòu)問題提供了很好的幫助。
免疫電鏡技術(shù)在腎病理中得到廣泛的應(yīng)用。通過設(shè)計(jì)特異性抗體結(jié)合膠體金，可以根據(jù)免疫病理學(xué)的原理檢測(cè)腎小球內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白成分或致密物的性質(zhì)和分布，為腎病的診斷及發(fā)病機(jī)制的研究提供更精確的信息和診斷依據(jù)。
免疫膠體金技術(shù)在腫瘤研究中也得到廣泛的應(yīng)用。腫瘤組織常用其相對(duì)特異性的標(biāo)記物，如肝癌組織過量表達(dá)甲胎蛋白、胰島素樣生長(zhǎng)因子I等，結(jié)腸癌異常表達(dá)癌胚抗原，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤則異常分泌一些激素如Chromogranin A等，使用免疫電鏡技術(shù)檢測(cè)這些抗原表達(dá)，有助于相關(guān)腫瘤的分型、診斷和鑒別診斷。
免疫金標(biāo)記法可以明顯地提高液體樣品中待檢病毒的檢出率，靈敏度較高，可廣泛應(yīng)用于各種病毒，特別是小球形狀病毒的電鏡診斷。
隨著分子生物學(xué)和生物化學(xué)研究的發(fā)展，特定蛋白質(zhì)在超微結(jié)構(gòu)中的定位顯得尤為重要。盡管光學(xué)顯微鏡經(jīng)過技術(shù)革新涌現(xiàn)了許多超高清拍攝技術(shù)，但是目前其對(duì)于蛋白質(zhì)的精確定位還具有一定的難度。
電子顯微鏡由于其高分辨的特點(diǎn)，依然是研究特定蛋白質(zhì)作用機(jī)理和功能不可缺少的工具。
不同于免疫組化技術(shù),免疫電鏡技術(shù)，或稱為電鏡免疫標(biāo)記技術(shù)(immunoelectron microscopy,IEM)，該方法為精確定位超微結(jié)構(gòu)中各種抗原在組織和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)上的定位、研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及其在病理情況下所發(fā)生的變化提供了有效的手段。
免疫電鏡較之常規(guī)透射電鏡技術(shù)，在制樣難度上要求更高，因?yàn)榧纫３至己玫某⒔Y(jié)構(gòu)，又要保證抗原的活性。而實(shí)際上，抗原是由生物大分子組成的,在固定劑和脫水劑極有可能導(dǎo)致抗原二級(jí)結(jié)構(gòu)或高級(jí)結(jié)構(gòu)的變化；其次，過高濃度的固定劑、脫水過程以及包埋劑都難免會(huì)破壞細(xì)胞或組織的抗原活性。另一方面，目標(biāo)抗原是否暴露于能夠被抗體識(shí)別的表面位置，也是免疫電鏡技術(shù)的另一個(gè)難點(diǎn)所在。
重慶宣尊生物科技有限公司
您身邊的科研定制化服務(wù)專家
宣尊生物透射電鏡實(shí)驗(yàn)中心在為各位客戶提供開放式、高質(zhì)量透射電鏡的制片、拍照、診斷一站式服務(wù)的同時(shí)，不斷深耕免疫電鏡技術(shù)！
如您需要免疫電鏡具體檢測(cè)信息，可直接撥打全國(guó)服務(wù)熱線023-86185422詳詢！
掃一掃，反饋當(dāng)前頁面
宣尊生物
